科研干货 | HEK293细胞系

       近年来，用于重组蛋白药物生产的主要细胞为哺乳动物细胞，因为它们具有类似人类细胞的糖基化修饰方式，例如CHO细胞、BHK细胞、Sp2/0等细胞常被用于制备生物制药。然而这些小鼠来源的细胞与HEK293细胞相比，缺乏人的细胞翻译后修饰系统，因此与人源系统表达的蛋白有差异。目前，HEK293 衍生的细胞系被广泛用于生产蛋白、疫苗、抗癌试剂及重组腺病毒包被等。

1.什么是HEK293

       HEK293细胞，又叫人胚胎肾细胞293，是一个衍生自人胚胎肾细胞的细胞系。HEK293细胞极少表达细胞外配体所需的内生受体，是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad5)DNA的永生化细胞，表达腺病毒5的基因。商业化的HEK细胞均来源于1977年Graham 转化的HEK细胞。因其具有转染效率高，易于培养等特点，成为了广大研究者研究基因功能的一个强大工具。

2.HEK293细胞表达系统的优势

1) 转染效率高；

2) 可悬浮培养用于大规模表达；

3) 表达蛋白结构最接近其在人体内构象；

4) HEK293细胞在培养体系中能够快速增长，高密度培养。

5) HEK293细胞与神经元细胞一样，对外界微环境较为敏感，利用这一特点，可用于药物发现及细胞毒性测试。

3.HEK293细胞系概览

（注：以下细胞介绍中，HEK293细胞简称为293细胞）

• 293T细胞：293细胞中转入SV40T-antigen基因形成的高转衍生株，即为293T细胞系。这使得包含SV40ori的质粒能够在该细胞系中显著扩增，从而促进表达载体的扩增，促进蛋白的表达。293T细胞除了可用于各类基因表达及蛋白生产，还可用于高滴度逆转录病毒及其他病毒生产，如腺病毒及其他哺乳动物病毒。
• 293T/17细胞：293T细胞中共转染入pBND 和 pZAP 质粒，获得的具有G418耐受的细胞系即为293T/17细胞系。该细胞系在保有293T细胞的优良性能之外，还具有高转染性的特点。
• 293H细胞：293H细胞则指的是将293细胞驯化后得到的能够在无血清培养体系下快速生长、具有高转染效率及高效蛋白表达性能的细胞系。另外，该细胞系贴附力好，而被用于噬菌斑检测等应用。
• 293E细胞：293E细胞指的是在293-H细胞中插入EBNA-1基因的细胞系，该基因能够稳定表达EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV复制起点（oriP）的重组表达质粒，能够在H293E细胞中复制，并实现蛋白的高效表达。
• 293F细胞：293F细胞是一类能够在无血清中高表达蛋白的野生型293细胞系。293FT细胞是在293F细胞系中插入pCMV- SPORT6-TAg.Neo质粒的转化细胞系，能够快速增殖，易转染，其能够用于慢病毒的生产。
• 293S细胞：293S细胞则指的被驯化成能够悬浮培养且能够耐受低钙离子培养条件的293细胞系。
• 293SGGD细胞：293SGGD细胞系则指的是在293SG转染pcDNA3.1-zeo-STendoT质粒的细胞系，其主要用于糖基化工程研究中。

4.HEK293衍生细胞的残留DNA检测

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