新品上市 | PG13细胞生产纯化过程中残留DNA的检测

       PG13细胞系是由小鼠胚胎成纤维细胞（N1H3T3）整合莫洛尼氏白血病毒（MLV）表达载体和长臂猿白血病病毒（GALV）胞膜蛋白基因改造而获得的。PG13细胞作为一种包装细胞目前主要应用于细胞产品（如CAR-T/TCR-T细胞等）的开发。通常采用PG13细胞包装逆转录病毒，生产逆转录病毒载体，再侵染患者T淋巴细胞，制成细胞制剂从而实现基因治疗和细胞治疗。

       作为生产逆转录病毒载体的主要包装细胞，PG13在生产和纯化过程中可能存在细胞衍生、残留的宿主细胞DNA杂质，这些残留DNA存在潜在的致癌风险，因此从安全角度考虑，需要对产品的PG13细胞DNA残留的含量和浓度进行检测。对此各国也对宿主细胞DNA残留做了相关规定。

• WHO和美国FDA现行指导方针推荐成品中残留DNA不高于10 ng/剂，长度不大于200 bp。美国FDA发布的指导原则中指出生物制品宿主细胞DNA残余限度为100 pg/剂，对于大剂量生物制品如单克隆抗体，根据其残留DNA来源及给药途径，DNA残留量可放宽至10 ng/剂。

• 欧洲药典通则规定的生物制品残留DNA限度大多为不超过10 ng/剂，但对个别疫苗的残留DNA限定标准更严格，如甲型肝炎灭活疫苗中的DNA残留量不得超过100 pg/剂，乙型肝炎疫苗中的DNA残留量不得超过10 pg/剂。

• 《中国生物制品规程》中规定rDNA含量每剂量应不高于10ng。《中国药典》2020版(三部)中提出需采用适宜的方法对生物制品中的宿主DNA进行检测，限定标准在各论中多为小于10ng/剂。

对于外源性DNA残留量的检测方法，《中国药典》2020年版通则中，收录了DNA探针杂交法和荧光染料法、定量PCR法三种，其中DNA探针杂交法，耗时较长且灵敏度较低，只可定量检测至微克与纳克级别。荧光染料法，不具有序列特异性，所以容易受到其他DNA序列的干扰。且灵敏度低，以PicoGreen染料法为例，仅能检测0.2ng/mL的纯DNA溶液。而实时定量PCR法是一种灵敏度高、特异性强且可通过实时监控进行定量的核酸检测技术，目前常用的有两种化学物质，一种是基于双链DNA的结合染料，如SYBR Green，但其与DNA亲和力强，通常对PCR反应有抑制作用；另一种是TaqMan®技术，此技术特异性强，灵敏度较高，它的定量范围也最宽，可以从微克级别跨越至飞克级别。

zoty中欧中国生物依据《美国药典》<509>通则和<1130>以及《中国药典》通则<3407>中的各种检测方法，最终选择荧光探针（TaqMan®）qPCR法作为细胞残留DNA检测的方法。该方法具有特异性强、灵敏度高等特点，在目前生物制药细胞核酸残留检测中被广泛使用。

依据此原理，zoty中欧中国生物自主研发了PG13残留DNA（qPCR）检测试剂盒。

本试剂盒配套有PG13 DNA定量参考品可快速准确定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中PG13残留DNA。试剂盒的检测范围为：300 pg/µL-0.003 pg/µL。本试剂盒可与zoty中欧中国生物宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒以及全自动核酸提取仪配套使用。样本经过前处理提取后用此试剂盒可以更高效、快速、准确地检测PG13细胞宿主DNA。

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关于zoty中欧中国生物

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       zoty中欧中国生物致力于在CGT药企、抗体药、疫苗等领域提供专业合规的工艺杂质残留、宿主细胞核酸及蛋白残留、含量测定、外源污染物检测等产品和服务。结合医药产业发展需求，公司特色的快速即用型检测开发技术已经覆盖20多种检测试剂盒系列产品，拥有专利类知识产权 10 余项。作为助力您成功的生物安全检测合作伙伴，zoty中欧中国生物始终坚持生物原料中国造，为生物医药安全提供国际品质的产品和专业的技术服务。

       zoty中欧中国生物科技（山西）有限公司经专业机构 北京国医械华光认证有限公司 评审专家的严格审核后，顺利通过GB/T 42061-2022 idt ISO13485:2016医疗器械质量管理体系认证，体系覆盖产品设计开发、生产和服务全过程，并且获得认证证书。

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